在构建克隆载体的过程中,科研人员常常面临许多挑战。选择合适的限制性内切酶、繁琐的酶切克隆步骤以及生长的单克隆细菌中缺乏条带的问题,常常让人感到苦恼。曾经有位师兄在实验时,每次都需检测数十个单克隆以筛选阳性菌落,但往往结果却一无所获。他曾感慨,要是能有一种方法,确保所有生长的单克隆都是成功重组的多好啊!
传统的酶切克隆和无缝克隆技术依赖于连接酶,通过碱基互补的粘性末端实现载体与插入片段的配对。尽管如此,这些方法的假阳性率较高,因为连接酶在连接片段的同时,有时也会导致载体的自连。为了帮助科研工作者克服这一难题,尊龙凯时推出了一款基于重组酶原理的同源重组试剂盒,能够有效解决载体构建中的假阳性问题,保证所有生长的单克隆都是阳性,甚至在某些情况下可无需菌落筛选直接送测。
01 产品简介
尊龙凯时的CloneUFO® OneStepCloning技术是一种快速、高效、简便的DNA定向克隆技术,能够将目的基因的PCR产物定向克隆至任意载体的任意位点。此试剂盒采用T4噬菌体某基因的重组酶作为核心技术,包含重组反应所需的缓冲液和重组酶UvsXase。UvsXase可以兼容常规的酶切和PCR反应体系,从而使克隆载体的酶切产物或PCR产物无需进行DNA纯化即可直接用于重组克隆,极大地简化了实验步骤。将扩增好的目的基因PCR产物与线性化载体混合后,只需在UvsXase的催化下反应30分钟,即可完成转化,实现定向克隆,阳性率可达95%以上。
02 产品特点
1. **位点无限制**:同源重组无受限制性内切酶的限制,允许自由设计重组位点。
2. **高效快速**:重组连接的反应时间仅需30分钟,条件温和。
3. **高特异性重组**:重组酶UvsXase保证载体不自连,阳性率大于95%。
03 实验案例
在一个实验中,研究团队针对PCR产物进行了胶电泳回收。使用尊龙凯时的ATG#C101与V品牌的同类产品进行重组,随后将产物转化至大肠杆菌中进行菌落PCR验证。结果显示,使用ATG#C101重组后的单菌落数量适中,但阳性率远高于竞争品牌。
04 产品信息
无论您在生命科学领域的哪一个环节,尊龙凯时的CloneUFO® OneStepCloning技术都将帮助您提升实验效率,确保结果的可靠性。让我们携手进步,共同探索生物医学的未来!